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CCK-8試劑盒，細胞增殖及毒性檢測試劑盒說明書

Cell Counting Kit-8
目錄號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格 包裝
1210-100 Cell Counting Kit-8 100 T 1ml
1210-500 Cell Counting Kit-8 500 T 5ml
1210-1000 Cell Counting Kit-8 1000 T 10ml
1210-3000 Cell Counting Kit-8 3000 T 30ml
保存：4℃密封避光保存，有效期一年。
產(chǎn)品簡介：
Cell Counting Kit-8 簡稱 CCK-8 試劑盒，為 MTT 法的替代方法，是一種基于 WST（水溶性四唑鹽，化學(xué)
名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的
快速高靈敏度檢測試劑盒。可用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗

CCK-8試劑盒，細胞增殖及毒性檢測試劑盒說明書

使用說明：
一、制作標準曲線（測定細胞具體數(shù)量時）
1、先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量，然后接種細胞。
2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做 3-5 個細胞濃度梯度，每組 3-6 個復(fù)孔。
3、接種后培養(yǎng)至細胞貼壁，然后加 CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時間后測定 OD 值，制作出一條以細胞數(shù)量為橫
坐標（X 軸），OD 值為縱坐標（Y 軸）的標準曲線。根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量（試用
此標準曲線的前提是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入 CCK-8 后的培養(yǎng)時間。）
二、細胞活性檢測
1、在 96 孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（在 37℃,5% CO2的條件下）。
2、向每孔加入 10μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數(shù)）。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時。
4、用酶標儀測定在 450nm 處的吸光度。
5、如果暫時不測定 OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入 10μL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)
溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
三、細胞增值-毒性檢測
1、在 96 孔板中配置 100 μL 的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時（在 37 ℃，5% CO2 的條件下）。
2、向培養(yǎng)板加入 10μL 不同濃度的待測物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間（例如：6、12、24 或 48 小時）。
3、向每孔加入 10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數(shù)）。如果待測物質(zhì)
有氧化性或還原性的話，可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加
入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。
4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時。
5、用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。
6、如果暫時不測定 OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入 10μL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)
溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
2
活力計算：. 細胞活力（％）=[A(加藥)－A(空白)]／[ A(0 加藥)－A(空白)]×100
A（加藥）：具有細胞、CCK-8 溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培養(yǎng)基和 CCK-8 溶液而沒有細胞的孔的吸光度
A（0 加藥）：具有細胞、CCK-8 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力
注意事項：
①建議先做幾個孔摸索接種細胞的數(shù)量和加入 CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時間。
②白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。
③當(dāng)使用標準 96 孔板時，貼壁細胞的zui小接種量至少為 1 ,000 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度
相對較低，因此推薦接種量不低于 2,500 個/孔 ( 100 μL 培養(yǎng)基)。如果要使用 24 孔板或 6 孔板實驗，請先計算
每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的 10% 加入 CCK-8 溶液。
④如果沒有 450nm 的濾光片，可以使用吸光度在 430-490 nm 之間的濾光片，但是 450nm 檢測靈敏度zui高。
⑤培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。
CCK-8 法與其它檢測方法之間的比較：
細胞計數(shù)方法 MTT 法 XTT 法 WST-1 法 CCK-8 法
形成的 formazan
的水溶性
差 好 好 好
產(chǎn)品性狀 粉末 2 瓶溶液 溶液 1 瓶溶液
使用方法 配成溶液后使用 現(xiàn)配現(xiàn)用 無需預(yù)制 無需預(yù)制
檢測靈敏度 高 很高 很高 高
檢測時間 較長 較短 較短 zui短
檢測波長 560-600nm 420-480nm 420-480nm 430-490nm
細胞毒性 高，細胞形態(tài)*消失 很低，細胞形態(tài)不變 很低，細胞形態(tài)不變 很低，細胞形態(tài)不變
試劑穩(wěn)定性 一般 較差 一般 很好
大批量樣品檢測 可以 非常適合 非常適合 非常適合
便捷程度 一般 便捷 便捷 非常便捷

CCK-8試劑盒，細胞增殖及毒性檢測試劑盒說明書