狂犬N蛋白(NP)包被抗體該病毒具有較強的神經組織嗜性,是致死性傳染病-狂犬病的病原體。狂犬病病死率很高,目前尚無有效治療藥物。我國是狂犬病嚴重流行國家之一,近年來,我國狂犬病呈快速上升趨勢,形成了自1950年以來的第三次大流行。因此建立狂犬病毒安全、快速并特異的實驗室檢測方法以提高狂犬病的實驗室監測能力對狂犬病的防控非常必要。 狂犬病毒含5個結構蛋白,其中N蛋白是狂犬病毒的主要組成部分,其一級結構高度保守,存在著較高的狂犬病毒屬的抗原交叉性,常作為狂犬病毒篩查和診斷應用的檢測用抗原。pFastbac-to-bac桿狀病毒表達系統通過外源基因特異性位點的轉座作用可對外源基因進行高效的表達。該系統除了具有傳統桿狀病毒表達系統產量高、易純化、安全性高、對翻譯后蛋白進行加工修飾等優點,還能利用表達載體N端多聚組胺酸標簽對目的蛋白進行純化。因此本研究選擇pFastBac-to-Bac桿狀病毒表達系統對狂犬病病毒標準攻擊強毒株(CVS-11)N基因進行表達,為檢測試劑的研發和進一步建立實驗室檢測方法奠定基礎。本實驗應用RT-PCR方法擴增獲得CVS-11 N基因片段,克隆入桿狀病毒供體質粒pFastBac中,構建克隆有CVS-11 N基因的重組質粒pFastBac-N;將pFastBac-N轉化DH10Bac E.coli感受態細胞,獲得CVS-11 N基因桿狀病毒重組表達質粒Bacmid-N;脂質體介導Bacmid-N轉染Sf9昆蟲細胞,60h后Sf9細胞出現了明顯病變,提取轉染后細胞DNA,PCR鑒定結果表明成功獲得了表達CVS-11株N基因的P1代重組桿狀病毒(AcMNPV-N)。 AcMNPV-N連續接種兩代細胞擴增病毒,獲P3代AcMNPV-N感染Sf9單層細胞,40h后收獲細胞進行DFA、SDS-PAGE和Western-blot鑒定。

狂犬N蛋白(NP)包被抗體

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